色谱小知识 | 准确配置流动相的重要性

缓冲溶液是指由弱酸及其共轭碱（或弱碱及其共轭酸）所组成的缓冲对配制的，且能够在加入少量强酸或强碱时，可以有效减缓pH值改变的水溶液。缓冲溶液能帮助维持分析方法的稳定，而不会因为微弱的环境改变的情况下而造成分析结果的改变。

缓冲溶液是被用来维持pH值的稳定。它们是通过维持弱酸及其共轭碱的平衡从而防止了pH值的改变。

• 在配制缓冲液前，建议用定值校准缓冲液标准品来校对电子pH计

• 根据所需缓冲液的浓度，精确地称出所需缓冲盐的重量

• 把所需的缓冲盐加到已经装有HPLC色谱级超纯水的容量烧瓶中，并充分搅拌至*溶解

• 使用pH探针或pH计去测量溶液的pH值

• 通过添加少量的强酸或强碱，将容液的pH值调整至所需的值

• 调整至所需pH值后，将溶液用色谱级超纯水稀释至最终的所需体积容量，并混合均匀

HPLC缓冲液通常用于控制在液相色谱分析中所不希望出现的二次相互作用。此外，缓冲液也被用来工作分析物的电离状态，以确保分析物不会同时出现一个以上的电离状态。

化合物的pKa值代表此化合物的50%离子化和50%中性时的pH值。如果在此pH值下分析此化合物，你会看到分裂峰的出现或者不稳定的保留时间。因此，我们建议所有的分析方法的pH值都应该控制在目标分析化合物的pKa值正负两个pH单位以上。

当配制等度流动相的时候，我们

还需要考虑以下几个因素来确保方法的稳定

• 尽可能提前预混合你所使用的流动相，因为这将防止经过泵混合流动相时会出现的错误

• 每一次都需要始终使用相同的配制方法及流程。例如，如果你方法是先加水，那你每次都必须是先加水。如果你是先测定单独的成分然后再混合，那你就必须每次都按这个流程来做。记得千万不要改变这一个固定的配制流程，因为这个配制流程的改变让分析物的保留时间可能出现很大的改变

以下的这个实验例子展示了当流动相

用以下不同的方式来混合时，

峰保留时间可能出现的改变